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整体柱得到新的发展
  • 发布日期:2017-07-19      浏览次数:1459
    •    整体柱作为继多聚糖、交联与涂渍、单分散之后的第四代分离介质,正是应复杂样品体系(如:生物样品、环境样品等) 的快速、、高通量分析需要而发展起来的一种新型色谱柱。
        整体柱是一种用有机或无机聚合方法在色谱柱内进行原位聚合的连续床固定相,具有制备简单、重现性好、多孔性优越、能实现快速、分离等优点。目前整体柱制备技术已日趋成熟,其有机和无机聚合制备方法都得到很大发展,并在普通液相色(HPLC) 、毛细管电色谱(CEC) 、微柱液相色谱(μ- HPLC) 等系统上, 成功地应用于生命科学、药物学、环境科学等领域的分离分析。
        整体柱的应用:
        生物大分子或聚合物的分离多见于有机聚合物骨架的HPLC整体柱,而小分子的分离一般见于硅骨架的整体柱和有机聚合物骨架的CEC整体柱。其原因可能是原位聚合得到的整体柱总会存在一定的孔径分布,以方式分离小分子时,扩散严重,柱效差。而用于HPLC的硅整体柱分离小分子的优势,原因可能与骨架硬度高和流速高有关。
        (1)离子交换色谱柱 聚(甲基丙烯酸缩水甘油酯-亚乙基二甲基丙烯酸酯)整体柱用乙二胺衍生化得到阴离子交换色谱柱,分离溶菌酶、大豆胰岛素抑制剂(Soybean Trypsin Inhibitor)和伴白蛋白(Conalbum in)等蛋白质,也可以分离聚脱氧腺苷酸(12~18个重复单位)和聚胸腺嘧啶核苷酸(12~24个重复单位)。卫引茂等将氯乙酸接到胺化好的柱子上得到弱阳离子交换柱,可用于分离5标准蛋白。
        (2)亲和色谱柱 罗权舟等将蛋白质A连到聚合物上得到蛋白亲和色谱柱分分析了人IgG和BSA。Hahn等用一个十肽先与甲基丙烯酸缩水甘油酯反应,再与甲基丙烯酸缩甘油酯和亚乙基二甲基丙烯酸共聚,制得亲和色谱整体柱用于溶菌酶的分析。
        (3)疏水相互作用色谱 Xie等用甲基丙烯酸丁酯部分代替丙烯酰胺制得的HIC柱分离了5种蛋白质。
        (4)体积排阻色柱 聚丙烯酰胺整体柱多用做体积排阻色谱柱,在30min内能完全分离肌红蛋白、核糖核酸酶A、卵白蛋白、α-糜蛋白酶原、A、R-藻红蛋白五种蛋白质,还可以分离多肽和。
        (5)生物反应器 酶固定在整体柱上,可以得到生物反应器。 Massolin等利用Merck公司的整体硅胶氨基柱制备了霉素酰基转移酶的酶反应器,并利用它研究了一些2-芳氧基脂肪酸甲酯及其类似物的在线酶催化对称反应和分离。
        (6)反相色谱柱 将C18等疏水基团引入整体柱中,得到反相色谱柱。
        整体柱原位聚合不仅省时省力,还意味着柱子不必受装柱技术和填料的限制。相对于填充柱,整柱的空隙率较高,柱压低,使快速的分离分析和制备成为可能。有机相整体柱存在因流动相变会发生溶胀或收缩、机械强度差、比表面积小、柱容量差以及聚合过程中产生的微孔不利于小分子样的分析等问题,现有报道大都用于生物大分子的分离。硅骨架整体柱也存在必须预先聚合好装入套管中,制备繁琐,比表面积较小的问题。对这些问题的研究将使整体柱得到新的发展。
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